Биология » Методи исследования клеток » Фракционирование клеточного содержимого

Фракционирование клеточного содержимого
Страница 4

Обычно антитела извлекают из сыворотки, обогащенной антителами, которую получают путем многократного введения антигена животным (например, кролику или козе). Эта антисыворотка содержит гетерогенную смесь антител, каждый тип которых был образован определенными клетками, синтезирующими антитела (В-лимфоцитами).

Проблему гетерогенности антисыворотки удалось преодолеть в 1976 г. после разработки нового метода, который произвел революцию в исследовании внутриклеточных процессов с помощью антител. Этот метод включает клонирование В-лимфоцитов, секретирующих только один определенный тип антител. Время жизни В-лимфоцитов в культуре обычно весьма ограничено. Поэтому от иммунизированных мышей получают В-лимфоциты, секретирующие отдельные виды антител, и осуществляют их слияние с "бессмертными" клетками из опухоли В-лимфоцитарного происхождения. В результате образуется гетерогенная смесь гибридных клеток, из которых отбирают гибриды, способные размножаться в культуре и синтезировать антитела определенного вида. Эти так называемые гибридомы

клонируют по отдельности и получают клоны, каждый из которых является постоянным источником моноклональных антител

одного типа.

Основное преимущество метода гибридом определяется возможностью получения моноклональных антител против неочищенных молекул содержащихся в сложной смеси в качестве минорного компонента. Таким образом, в принципе можно получить моноклональные антитела против любого белка, содержащегося в клетке. Каждый тип антител можно затем использовать в качестве специфического зонда как для локализации белков с помощью цитологических методов, так и для очистки белков.

Поскольку плазматическая мембрана клеток непроницаема для крупных молекул, белки, расположенные внутри живых клеток, не могут взаимодействовать с антителами, добавляемыми извне. Если такие белки необходимо связать, в цитоплазму клеток эукариот можно ввести антитела и другие молекулы, инъецируя их тонкой стеклянной пипеткой через плазматическую мембрану. Прокалываемая плазматическая мембрана имеет способность "самозапаиваться" спустя некоторое время после инъекции.

Страницы: 1 2 3 4 

Статьи и публикации:

Нормальная кожа и уход за ней
Нормальная кожа имеет ровный оттенок, выглядит упругой, чистой, гладкой, обладает хорошим тонусом. Она хорошо переносит воду с мылом, различные косметические средства, декоративную косметику. Мягкая, эластичная, свежая, гладкая, не жирная ...

Сосудистый скелет цветка
Проводящие пучки идут в органы цветка из цветоложа. В точках внедрения листовых следов из листочков околоцветника, тычинок и плодолистиков в проводящую систему цветоложа ведут листовые щели. У чашелистиков столько же листовых следов, как ...

Черепные нервы
Все черепные нервы отходят от основания .головного мозга, за исключением одного (IV пары), который выходит из мозга с дорзальной его стороны (ниже крыши среднего мозга). За каждым нервом закреплен номер пары и название. Порядок нумерации ...